مشخصات پژوهش

عنوان	بررسی تاثیر موتاسیون D226Nدر ایزوآنزیم چشمی اینوزین منوفسفات دهیدروژناز (ایزوفرمهای415و )455موش بر میزان aggregationآنها
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	H1ایزوفرمهای ویژه شبکیه، رتینیت پیگمنتوزا،IMPDH1 D226N
چکیده	آنزیم اینوزین ΄ 5منوفسفات دهیدروژناز )IMPDH1( 1آنزیم کلیدی در مسیر بیوسنتز پورینها است و واکنش اکسیداسیون اینوزین منوفسفات به زانتوزین منوفسفات را در حضور کوفاکتور + NADکاتالیز میکند. آنزیم IMPDH1موشی دارای سه ایزوفرم (514ایزوفرم کنونیکال)، 546و (603ایزوفرمهای رتینال) میباشد. جهش در ژن ایزوفرم 546در انسان موجب بیماری رتینیت پیگمنتوزا ( )RP10میشود. بیماری RPیک اختلال ژنتیکی بوده که در آن گیرندههای نوری شبکیه تخریب میشوند. با کشف ایزوفرمهای ویژه شبکیه آنزیم IMPDH1در پستانداران این احتمال میرود که شاید این ایزوفرمها در شبکیه عملکرد ویژهای دارند که اختلال در آن موجب تخریب گیرندههای نوری میشود. دو جهش شایع عامل بیماری adRPکه در ژن آنزیم IMPDH1شناسایی شدهاند R224Pو D226Nمیباشد. به طوری که جهش D226Nبه تنهایی عامل دو درصد موارد adRPدر آمریکا گزارش شده است. ریشه آمینواسید ASP226در تمام آنزیمهای IMPDH1شناخته شده و در تمام گونهها کاملا حفظ شده است. این نشان دهنده این است که این آمینواسید که در دمین CBSآنزیم قرار دارد باید نقش بسیار مهمی در عملکرد آنزیم IMPDH1داشته باشد. اگرچه بررسیها نشان داده که این جهش هیچ گونه اثری بر فعالیت آنزیم ندارد. لذا، در این تحقیق هر دو ایزوفرم 514و 546نوع وحشی آنزیم IMPDH1 موش بیان، تخلیص و تعیین غلظت شدند و از نظر ساختاری با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون بررسی شدند. همچنین ایزوفرم 514آنزیم IMPDH1موشی به صورت جهش یافته( )D226Nدر باکتری اکولی کلون، بیان، تخلیص و تعیین غلظت شد و مجددا از نظر ساختاری با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت مطالعه بررسی ساختاری نوع وحشی و جهش یافته آنزیم IMPDH1باهم مقایسه شدند. نتایج نشان داد که نوع وحشی آنزیم IMPDH1متناسب با شرایط فیزیولوژیکی و محیطی تغییرات ساختاری قابل توجهی را از خود نشان میدهد به طوری که این تغییرات ساختاری روی فعالیت آنزیم اثر گذار بوده، در حالی که در نوع جهش یافته آنزیم IMPDH1 D226Nاز نظر ساختاری نسبت به شرایط فیزیولوژیکی و محیطی بسیار حساس شده به طوری که ساختارهای ماکرومولکولی بسیار بزرگی را ایجاد میکند. از آنجایی که جایگاه جهش نقطهای D226Nدر محل اتصال نوکلئوتیدهای پورین به آنزیم میباشد، احتمالا ساختار آنزیم با این جهش به گونهایی تغییر میکند که جایگاه اتصال نوکلئوتیدهای پورین مسدودشده و تمایل زیرواحدهای آنزیم جهت اتصال به یکدیگر به صورت نامنظم به شدت افزایش مییابد.
پژوهشگران	علی طراوتی (استاد مشاور)، راضیه یزدان پرست (استاد راهنما)، باقر سیدعلیپور (استاد راهنما)، مریم خالدی کیا (دانشجو)