مشخصات پژوهش

عنوان	بیان، خالص سازی و بررسی کارایی پروتئین نوترکیب حاصل از سازه ژنی کایمریک به منظور تولید واکسن زیرواحدی علیه سیتومگالوویروس
نوع پژوهش	مقاله ارائه شده
کلیدواژه‌ها	سیتومگالوویروس، پروتئین نوترکیب، واکسن زیرواحدی
چکیده	سیتومگالوویروس انسانی (HCMV) شایع ترین ویروس عفونت زای مادرزادی در سراسر جهان است. واکسن زیر واحدی یکی از روش های مناسب در راستای پیشگیری از ابتلا به این ویروس بوده که در این پژوهش از سازه ژنی شامل اپی توپ های شاخص محرک ایمنی، از آنتی ژن های گلیکوپروتئین B و فسفوپروتئین 55 و 150 ویروس استفاده شده است. سازه ژنی کایمریک در وکتور بیانی یوکاریوت pcDNA3+1 ساب کلون گردید. سپس وکتور بیانی نوترکیب به رده سلول یوکاریوت HEK293T انتقال یافت. بیان پروتئین نوترکیب با انجام تکنیک RT-PCR بررسی شد. سپس به منظور جداسازی پروتئین نوترکیب مورد نظر از میان مجموعه پروتئین های سلولی، خالص سازی با استفاده از ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی یون فلزی بی حرکت صورت گرفت. همچنین به منظور بررسی عملکردی بودن پروتئین نوترکیب خالص سازی شده، از تکنیک آگلوتیناسیون استفاده گردید. نتایج حاصل از کلونی-PCR، واکنش های هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد ساب کلونینگ قطعه هدف در وکتور بیانی با موفقیت صورت گرفت. همچنین بررسی نتایج حاصل از الکتروفورز محصولات RT-PCR تایید نمود پروتئین مورد نظر در سلول یوکاریوت بیان شده است. با بررسی نتایج حاصل از آگلوتیناسیون پروتئین نوترکیب خالص سازی شده و سرم دارای IgG اختصاصی علیه سیتومگالوویروس انسانی، نشان داده شد که پروتئین نوترکیب دارای خاصیت ایمونوژنیسیته می باشد. نتایج این مطالعه نشان داد پروتئین نوترکیب خالص سازی شده، کاندید مناسبی جهت ادامه مراحل و ارزیابی در مدل آزمایشگاهی می باشد. پیشنهاد می گردد در پژوهش های آینده تمامی روش های موثر در ساخت و تزریق واکسن مانند استراتژی Prime-boost هتروژن (DNA/Protein) مورد استفاده قرار گیرد.
پژوهشگران	الهه صباغیان (نفر چهارم)، علی طراوتی (نفر سوم)، فاطمه رودباری (نفر دوم)، فرانک غفاری (نفر اول)