|
چکیده
|
چرخه فولات نقش مهمی در فرآیند اسپرماتوژنز بازی می کند و هر گونه اختلال در آنزیم های کلیدی این مسیر ممکن است منجر به ناباروری مردان گردد. هدف این تحقیق، بررسی ارتباط پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی ژن های چرخه فولات (MTHFR C677T، MTHFR A1298C، MTHFR G1793A، MTR A2756G و MTRR A66G) با ناباروری مردان با استفاده از آنالیزهای وابستگی ژنتیکی، فراتحلیلی، شبیه سازی رایانه ای ( in silico) و برون تنی (in vitro) و اپی ژنتیک و نیز بررسی تغییرات بیان ژن MTHFR در رده سلولی DU145، به عنوان رده سلولی نمونه از سرطان پروستات در حضور داروی متوتروکسات بصورت ex vivo است. برای مطالعه آنالیزهای وابستگی ژنتیکی بطور متوسط از تعداد 500 نمونه خون شامل 250 مرد با ناباروری ایدیوپاتیک و 250 مرد بارور که در طی سال های 1392 -1395 از مراکز ناباروری شهرستان های بابل و کاشان جمع آوری شدند، استفاده شد. تعیین ژنوتیپ پلی مورفیسم های فوق به وسیله روش PCR-RFLP انجام شد. مطالعات مشابه به وسیله جستجوی سیستماتیک جمع آوری گردید و پس از غربالگری، نتایج مطالعات با یک رویکرد فراتحلیل، مقایسه شد. از ابزارهای بیوانفورماتیکی مبتنی بر ویندوز جهت آنالیزهای in silico استفاده شد. برای بررسی وضعیت متیلاسیون پروموتر ژن متیلن تتراهیدروفلات ردوکتاز در نمونه های سمن، از روش Methylation-specific PCR استفاده شد. تغییرات بیان ژن فوق در رده سلولی DU145، به وسیله روش Real time PCR ارزیابی شد. نتایج مطالعه وابستگی ژنتیکی نشان داد که ترانزیشن MTHFR C677T با الیگواسپرمی ارتباط معنی داری دارد (OR= 4.03, 95%CI= 1.02-15.90, p= 0.047). همچنین نتایج متاآنالیز روی 23 مطالعه موجود، نشان داد که این ترانزیشن در تمامی مدل های ژنتیکی به ویژه در مدل ژنتیکی مغلوب با ناباروری مردان ارتباط معنی داری دارد (OR= 1.38, 95%CI= 1.14-1.68, p< 0.001). اما نتایج آنالیز ترانزیشن MTHFR G1793A نشان داد که ژنوتیپ GA (OR= 0.37, 95%CI= 0.19-0.75, p= 0.005) و آلل A (OR= 0.43, 95%CI= 0.23-0.80, p= 0.008) با کاهش ریسک ناباروری مردان ارتباط دارد که این نتایج مطابق با نتایج حاصل از متاآنالیز روی 4 مطالعه مشابه بود. نتایج وابستگی ژنتیکی در مورد پلی مورفیسم MTR A2756G نشان داد که این ترانزیشن سبب افزای خطر الیگواسپرمی (OR= 2.54, 95%CI= 1.05-6.14, p= 0.038) و آزواسپرمی (
|