|
عنوان
|
جهش زایی هدفدار ژن سوپر اکسید دیسموتازانسانی حاوی جهش C146R در ارتباط با اسکلروز جانبی آمیوتروفیک
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله ارائه شده
|
|
کلیدواژه‌ها
|
جهش زایی هدفدار ، سوپر اکسید دیسموتازانسانی، جهش C146R، اسکلروز جانبی آمیوتروفیک
|
|
چکیده
|
سوپراکسید دیسموتاز انسانی ( (SOD1 یک متالوآنزیم و همودیمر است . هر زیرواحد آنزیم SOD1 شامل یک یون Cu ، Zn و یک پیوند دی سولفیدی درون مولکولی می باشد. SOD1 2-1 % کل پروتئین محلول در سیستم عصبی را تشکیل می دهد. این آنزیم باعث تخریب رادیکال سوپر اکسید به اکسیژن و پراکسیدهیدروژن می شود. در این تحقیق از پلاسمید pET28a حاوی ژن کد کننده سوپر اکسید دیسموتاز و E.coli سویه BL21 (DE3) مورد استفاده قرار گرفت. جهش زایی به روش Quick-change انجام شد. محصول تکثیر با استفاده از کیت شرکت فرمنتاز خالص شد و با افزودن DpnI و تیمار به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد هضم آنزیم ی پلاسمید حاوی ژن وحشی و انتقال پلاسمید به سلول E. coli سویه BL21 (DE3) با استفاده از روش شیمیایی (کلسیم کلراید سرد) انجام شد. جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری ها روی محیط حاوی آنتی بیوتیک مناسب (کانامایسین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید صورت گرفت. پس از حصول اطمینان از کیفیت استخراج پلاسمید از طریق بررسی برروی ژل آگارز1%، نمونه ها جهت تعیین ترادف به شرکت فزا پژوه ارسال شدند. توالی بدست آمده، ردیف نوکلئوتیدی و پروتئینی نمونه های وحشی و جهش یافته باهم مقایسه شدند و جهش تایید گردیدند. مطالعات ما با استفاده از نرم افزار yasara و سایت Expasyنشان داد تغییر در اسیدآمینه سیستئین 146 به آرژینین در جایگاه 8β و نقش اسیدآمینه سیستئین در ایجاد پیوند دی سولفیدی بین مولکولی، تغییر در ساختار آنزیم سوپراکسید دیسموتازرا تائید کرد. بنابراین جهش C146Rدر ژن سوپراکسید دیسموتاز در جایگاه 8β به عنوان عامل ژنتیکی مرتبط به شکل ارثی اسکلروز جانبی آمیوتروفیک می باشد.
|
|
پژوهشگران
|
سامان حسینخانی (نفر سوم)، باقر سیدعلیپور (نفر دوم)، سعیده محمدی (نفر اول)
|