مشخصات پژوهش

عنوان	بررسی اثر القایی cAMP بر سیستم اتوفاژی در رده سلولی HepG2 تیمار شده با کاتارانتین با ارزیابی فاکتور‌‌های Beclin1 ,LC3 ,ULK1
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	کاتارانتین، اتوفاژی، LC3, Beclin1, HepG2
چکیده	تومور‌‌ها یکی از مهمترین تهدیدات زندگی انسان در دنیاست و بهبود دارو‌های مورد استفاده در درمان آن‌‌‌‌ها همیشه مورد نیاز بوده است. کاتارانتین به طور طبیعی در بسیاری از گیاهان وجود دارد همچنین به طور صناعی توسط روش‌‌‌های مختلفی سنتز می‌شود. مطالعات مختلف روی ترکیبات شیمیایی کاتارانتین اثرات ضدسرطانی آن را نشان داده است. هدف اصلی پژوهش «بررسی اثر القایی CAMP بر سیستم اتوفاژی در رده سلولی HepG2 تیمار شده با کاتارانتین با ارزیابی‌‌فاکتور‌‌‌های Beclin1 ,LC3 ,ULK1» می‌‌باشد. این پژوهش از نظر هدف کاربردی، از نظر ماهیت کمی ‌‌‌‌و از نظر نحوه گردآوری داده‌‌‌‌‌‌‌ها آزمایشی می‌‌باشد. روش تحقیق به صورت کتابخانه ای و آزمایشگاهی ‌‌می‌‌باشد. ابزار گردآوری اطلاعات بصورت تجربی‌‌‌‌ و آزمایش می‌‌باشد. در این پژوهش فاکتور‌‌‌های Beclin1 ,LC3 ,ULK1 ساخته شده با غلظت‌‌‌های مختلف در 3 تکرار بر روی رده سلولی HepG2 تیمار شده با کاراتانین تاثیر داده شد تا میزان حیات سلولی آن‌‌ها به روش MTT مورد ارزیابی‌‌قرار گیرد. آزمون سمیت شناسی MTT یکی از روش‌‌‌های مطالعه میزان سمیت مواد بر روی سلول‌‌‌‌هایی است که به صورت برون تنی (In-Vitro) کشت داده شده اند. بعد از کشت سلولی ، شمارش سلول‌‌‌های زنده با لام نئوبار هموسایتومتر انجام شده و درصد و غلظت سلولها محاسبه میگردد ،مرحله بعد انجام پاساژ سلول ها است که پاساژ سلولی معمولا زمانی که تراکم سلول‌‌‌‌‌‌‌ها در فلاسک به 75% تا 80% برسد، به منظور کم کردن تراکم سلول‌‌‌های ظرف کشت و تجدید شرایط مناسب برای رشد و تکثیر سلول انجام می‌شود. بعد از آن میتوان سلول ها را به شکل فریز ذخیره سازی کرد و در مواقع نیاز احیا کرده و مجدد استفاده کرد. برای بررسی میزان بیان ژنها لازم است ابتدا RNA های سلول استخراج شود تا از روی آنها به کمک آنزیم Reverse Transcriptase یک مولکول DNA مکمل یا همان cDNAساخته شود. پس از ساخت cDNA امکان آنالیز کمی میزان بیان ژن مربوطه توسط واکنش های real-time PCR فراهم میگردد. ریل تایم PCR روشی است که در آن تجمع محصول تکثیر شده در طی مراحل تکثیر با استفاده از ماده فلورسانس در دستگاه خاصی مورد ارزیابی و اندازه گیری قرارمیگیرد، با اندازه‌گیری شدت نور فلورسانس در انتهای هر سیکل، نهایتاً یک منحنی بدست می‌‌آید و با روش فلوسایتومتری که بر اساس پراکنده سازی نور توسط سلول‌های مورد آزمایش و انتشار فلورسانس از آنها استوار است بررسی میشود. نتایج تحقیق نشان داد کاتارانتین در رده سلولی HepG2، سمیت قابل توجهی ایجاد می‌‌کند و احتمال وقوع اتوفاژی در رده سلولی HepG2 را افزایش می‌‌دهد. همچنین میزان فاکتورULK1 وBeclin1 وLC3 را در رده سلولی HepG2 افزایش می‌‌دهد. خروجی داده‌‌‌‌‌‌‌ها نشان داد کاتارانتین پیام‌‌رسانی فعال شده با cAMP بدنبال افزایش PKA در رده سلولی HepG2 افزایش می‌‌دهد. همچنین کاتارانتین می‌‌تواند همراه دارو‌های ضدسرطان، مکمل دارویی خوبی‌‌برای بیماران مبتلا به سرطان کبد باشد، هرچند از بابت اثرات جانبی‌‌روی سایر اعضا، نیاز به مطالعه حیوانی دارد. خاصیت ضدسرطانی و موثر بودن کاتارانتین نیازمند تحقیقات بیشتر در مطالعات بیوشیمی‌‌‌‌ و پزشکی است.
پژوهشگران	احسان نظیفی (استاد مشاور)، الهام بحرینی (استاد راهنما)، باقر سیدعلیپور (استاد راهنما)، فرنوش غلامی (دانشجو)