مشخصات پژوهش

عنوان	بررسی مقایسه ای تغییرات آنزیماتیکی و ساختاری شکل هولو در نوع وحشی و موتانت N65S سوپراکسید دیسموتاز انسانی
نوع پژوهش	مقاله ارائه شده
کلیدواژه‌ها	سوپراکسید دیسموتاز انسانی1، اسکلروز جانبی آمیوتروفیک، حلقهIV ، فلورسانس ذاتی، موتانت N65S
چکیده	سوپراکسید دیسموتاز انسانی 1(hSOD1) آنزیم آنتی اکسیدانی است که آنیون سوپراکسید را به پراکسید هیدروژن و آب کاتالیز می کند. بیش از 180 جهش مختلف در ژن SOD1 در ارتباط با اسکلروز جانبی آمیوتروفیک (ALS)، گزارش شده که بسیاری از آنها به دلیل جایگزینی اسید آمینه است. دراین مطالعه با جایگزینی آسپارژین با سرین (N65S) واقع در لوپ اتصال روی (Loop IV)، اثر جهش بر فعالیت و خصوصیات ساختاری بررسی شد. وکتور pET-28a-hSOD1 بعنوان الگو برای جهش زایی به روش Quick-change PCR استفاده شد. Wild Type-hSOD1 و پروتئین جهش یافته در E. coli-BL21 (DE3) بیان شد و با استفاده کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA آگارز تخلیص شد. سنجش فعالیت ویژه آنزیمی با استفاده از سوبسترای پیروگالول مورد سنجش قرار گرفت. ارزیابی مقایسه ایی ساختاری بین پروتئین تیپ وحشی و جهش یافته با استفاده از فلورسانس ذاتی انجام شد. همچنین برای پیش بینی اثرات جهش بر ساختار از سرور PREDICT SNP استفاده شد. نتایج سرور بیوانفورماتیک اثر مخرب جهش را بر ساختار پروتئین نشان داد. فعالیت آنزیمی تیپ وحشی نسبت به جهش یافته ی N65S در غلظت 1/0 میلی مولار پیروگالول کاهش یافت. افزایش نشر فلورسانس ذاتی جهش یافته در مقایسه با تیپ وحشی نشان دهنده تغییرات ساختاری و قرار گرفتن باقی مانده تریپتوفان 32 در یک محیط غیر قطبی بود. به طور کلی، نتایج ما نشان داد که جهش در حلقه IV منجر به تغییرات ساختاری و پیامدهایی برای شروع بیماری ALS می شود. بامطالعات بیشتر روی حلقه IV می توان شواهد واضح تری درارتباط با فنوتیپ ALS ارائه کرد.
پژوهشگران	سامان حسینخانی (نفر سوم)، باقر سیدعلیپور (نفر دوم)، نازنین سلیمانی فرد (نفر اول)