مشخصات پژوهش

عنوان	خالص سازی نسبی آسپاراژیناز از کبد گاو و ارزیابی پارامترهای سینتیکی آن در مجاورت اسانس برخی از گیاهان خانواده نعنائیان
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	اسانس، ال-آسپاراژیناز، پارامترهای سینتیکی، خالص سازی نسبی، نعناییان
چکیده	ال-آسپارژیناز به دلیل دارا بودن خاصیت کاتالیزوری هیدرولیز پیوند آمیدی زنجیره جانبی ال-آسپاراژین و تبدیل آن به ال-آسپارتات و آمونیاک، به عنوان یکی از مهم‎ترین داروهای ضدسرطان در سراسر جهان شناخته شده است. این پژوهش با هدف اندازه‎گیری فعالیت و پارامترهای سینتیکی آنزیم ال-آسپاراژیناز و تغییرات آنها در مجاورت اسانس برخی گیاهان خانواده نعناییان انجام شد. در این مطالعه بافت کبد تازه گاو در بافر تریس-HCl هموژن شد. سپس با استون 60 درصد رسوب گیری و به طور جزیی استخراج و فعالیت آنزیم به روش نسلریزاسیون سنجیده شد. سپس فعالیت آنزیم در غلظت‎های مختلف آسپاراژین اندازه گیری شد و نمودارهای میکائیلیس-منتن و لاینویوربرک رسم گردید. از اسانس گیاهان نعنا، وارنگ بو و مرزنگوش جهت بررسی تغییرات پارامترهای سینتیکی آنزیم استفاده شد. اسانس گیری به روش تقطیر با آب مقطر با دستگاه کلونجر انجام شد. میزان غلظت پروتئین mg/ml 5 اندازه گیری شد. بیشترین مقدار فعالیت و فعالیت ویژه آنزیم برای فراکسیون %60 استون برابر باU/ml 44/52 و U/mg91/10 بدست آمد. بررسی پارامترهای بیوشیمیایی آنزیم نشان داد بهینه فعالیت آنزیم در دمای C°35 ، 8=pH و غلظت mM 5 آسپاراژین می‎باشد. همچنین میزان پایداری آنزیم در دمای C°40-30 و pHهای 7 تا 8 تعیین شد. مقدارKm و Vmax برای آنزیم به ترتیب mM 437/0 وmM/min 0278/0 بدست آمد با افزودن مقادیر20، 50 و 100 میکرولیتر اسانس نعنا میزان Km آنزیم به ترتیب 408/0، 39/0، 35/0 میلی مولار و مقادیر Vmax به ترتیب 038/0، 04/0 و 049/0 میلی مولار بر دقیقه محاسبه گردید. علاوه بر این با افزودن همان مقادیر اسانس مرزنگوش ثابت Km به ترتیب 411/0، 344/0، 22/0 میلی مولار و میزان Vmax به ترتیب 029/0، 038/0 و 051/0 میلی مولار بر دقیقه تعیین گردید. با افزودن مقادیر ذکر شده اسانس وارنگ بو میزان Km آنزیم به ترتیب 52/0، 79/0، 99/0 میلی مولار و سرعت بیشینه به ترتیب 0259/0، 023/0 و 015/0 میلی مولار بر دقیقه حاصل شد. همچنین میزان Ki مربوط به اسانس وارنگ بو 038/0 میلی مولار محاسبه شد. از آنجایی که بیشترین ترکیب سازنده اسانس نعنا و مرزنگوش به ترتیب دی-کارون و 3-نونن اندازه گیری شد، احتمالا مجاورت این ترکیبات با آنزیم موجب افزایش میل ترکیبی جایگاه فعال آنزیم با سوبسترا شده است و بنابراین موجب فعال شدن آنزیم می‎شود. از ط
پژوهشگران	علی علی نژاد تیلکی (استاد مشاور)، مریم مهاجرانی (استاد راهنما)، زهرا قربانی (دانشجو)