علی طراوتی

آنزیم گلوتاتیون S-ترانسفراز (EC.2.5.1.18) یک پروتئین دایمر و چند عملکردی است که تصور می شود درشروع فرایند سم زدایی از ترکیبات فعال دارویی نقش فیزیولوژیکی دارد. این آنزیم واکنش میان ترکیبات گزنوبیوتیک و گروه تیول را کاتالیز می کند که منجر به کاهش فعالیت بیولوژیکی و افزایش حلالیت این ترکیب می شود که به حذف راحت تر آن ها کمک می کند. بررسی های صورت گرفته روی آنزیم GST در بسیاری از گونه های باکتری ها و همین طور بی مهرگان، نشان گر وجود رابطه میان میزان فعالیت آنزیم GST و قدرت تحمل این ارگانیسم ها به سموم خارجی در آن ها بوده است. گاماروس از جمله بی-مهرگانی است که به طیف گسترده ای از آلاینده ها حساس است و برای تشخیص آلاینده های محیطی مناسب می باشد، به همین دلیل معمولا به عنوان ارگانیسم مدل در مطالعات آلودگی های محیط زیست استفاده می شود. باوجود اهمیت زیست محیطی گاماروس ها و علاقه به پژوهش روی آن ها، هنوز هم مطالعات بیوشیمیایی روی گاماروس به خوبی صورت نگرفته است. هدف از این تحقیق خالص سازی آنزیم GST در جهت رسیدن به درک بهتری از میزان فعالیت آنزیم و ارزیابی پارامترهای سینتیکی آن می باشد. به منظور خالص سازی ابتدا رسوب دهی با نمک آمونیوم سولفات انجام شد. سپس با استفاده از ستون های کروماتوگرافی تخلیص به روش های ژل فیلتراسیون، تعویض یونی و تمایلی صورت گرفت. نتیجه کار با روش SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت. در هر مرحله میزان فعالیت آنزیم بر اساس روش Habig و همکارانش سنجیده شد؛ همچنین مقدار پروتئین موجود در نمونه ها به روش برادفورد اندازه گیری شد تا با محاسبه فعالیت ویژه آنزیم به عنوان شاخص، میزان خلوص آنزیم را مورد بررسی قرار دهیم. فعالیت ویژه آنزیم در عصاره اولیه گاماروسU/mg 087/0 بود که پس از خالص سازی به U/mg 230/2 افزایش یافت. همچنین درجه خلوص آنزیم 409/45 و درصد بازیابی فعالیت آنزیم 134/2% محاسبه شد. پس از پایان مراحل خالص سازی به بررسی خصوصیات سینتیکی آنزیم پرداخته شد. در این بررسی ها دما و pH بهینه به ترتیب 45 درجه و 8 بدست آمد. همچنین با سنجش فعالیت آنزیم در غلظت های 005/0 تا 1 میلی-مولار کلرو2-4 دی نیترو بنزن (CDNB) به عنوان سوبسترای آنزیم و رسم نمودار میکائیلیس- منتن و لاین ویوربرگ، Km و Vmax آنزیم به ترتیب mM 005/0± 15/0 و mM/min 58/6 تعیین شد. بنابراین با توجه به خصوصیاتی