سلمان احمدی اسب چین

امروزه آمیلازها، یکی از پرکاربردترین آنزیم ها در صنایع غذایی، نساجی، شوینده ، بیوتکنولوژی و دارویی به شمار می آیند. این آنزیم ها به صورت گسترده در جانوران، گیاهان و میکروارگانیسم ها یافت می شوند و دارای ویژگی های فیزیکوشیمیایی بسیار متنوعی هستند. از آنجایی که پروسه های صنعتی همواره تحت شرایط ویژه و سختی انجام می شوند، یافتن آنزیم هایی با توانایی فعالیت در این شرایط حائز اهمیت است. باکتری های نمک دوست منبع مناسبی از این آنزیم ها می باشند، چراکه آنزیم های تولید شده توسط این میکروارگانیسم ها می توانند فعالیت خود را در دامنه های مختلف دما، غلظت نمک و pH حفظ کنند. نمونه برداری از چشمه های کلارآباد با هدف بررسی صفات باکتری های نمک دوست و تحمل کننده نمک دارای توان تولید آنزیم های هیدرولازی خارج سلولی به ویژه آمیلاز، صورت گرفت. نه جدایه نمک دوست و تحمل کننده نمک غربال-گری شدند و صفات ریخت شناسی و بیوشیمیایی آنان بررسی گردید. سپس توانایی تولید دوازده آنزیم هیدرولیتیکی مختلف خارج سلولی توسط جدایه ها در محیط های حاوی سوبسترای این آنزیم ها ارزیابی شد. یک جدایه به منظور آنالیز ژن 16S rRNA برگزیده و آنزیم آمیلاز آن نیز به منظور سنجش آنزیم و رنگ-آمیزی پروتئین با الکتروفورز استخراج گردید. جهت سنجش فعالیت آمیلاز، از روش برندفلد استفاده شد. از روش های رنگ آمیزی کماسی بریلیانت بلو R-250 و نیترات نقره برای بررسی ژل الکتروفورز SDS-PAGE پروتئین آمیلاز استفاده گردید. برای بررسی زایموگرام نیز از روش Overlay zymography استفاده شد. نتایج نشان داد که پنج جدایه توانایی تولید آنزیم آمیلاز خارج سلولی را دارند. رشد بهینه جدایه ها در محیطی با 5/7-5/2 درصد نمک سدیم کلراید و دمای 37-25 درجه سانتی گراد به دست آمد. سویه S-4، که توانایی بالایی در هیدرولیز سوبستراهای مختلف از خود نشان داد، به عنوان باکتری منتخب برگزیده شد. تعیین توالی و آنالیز ژن 16S rRNA سویه منتخب، 85/99 درصد شباهت را با باکتری Bacillus aryabhattai B8W22 نشان داد. نتایج سنجش آنزیم حاکی از آن بود که بیشینه فعالیت آنزیم در دمای 45 درجه و غلظت سوبسترای نشاسته 1% می باشد. با استفاده از الکتروفورزهای متعدد، اندازه باند پروتئینی آمیلاز در حدود کمتر از 5/6 کیلودالتون تخمین زده شد. در زایموگرام آمیلاز فقط یک هاله در انتهای ژل که حاصل فعالیت آ