علیرضا نقی نژاد

آنزیم های آلفا آمیلاز و آلفا گلوکوزیداز از آنزیم های کلیدی به شمار می آیند که مهار آنها در درمان بیماری دیابت نقش بسزایی دارد. استفاده از منابع طبیعی به عنوان مهار کننده برای این دو آنزیم، به علت وجود عوارض جانبی کمتر نسبت به مهار کننده های شیمیایی، از اهداف جدید به شمار می آید. گیاهان متعلق به تیره نعنائیان از مهمترین تیره های دارای اسانس شناخته شده اند که بررسی های متعددی بر روی پتانسیل عملکرد ضد دیابتی آنها انجام شده است. در این پایان نامه آنزیم های آلفا آمیلاز و آلفا گلوکوزیداز پس از هموژنیزاسیون و سانتریفیوژ از غدد گوارشی حلزون قهوه ای مرکبات استخراج شده و مورد بررسی قرار گرفتند. در تمام اندازه گیری ها میزان فعالیت آنزیم آلفاآمیلاز با سوبسترای نشاسته و با اثر دهی دی نیتروسالیسیلیک اسید و آنزیم آلفاگلوکوزیداز با سوبسترای پارانیتروفنیل آلفا-دی-گلوکوپیرانوزید انجام شد. اسانس گیری گیاهان آویشن (Thymus vulgaris L.)، اسطوخدوس(Lavandula angustifolia Mill.) و مرزنگوش (Origanum vulgare L.) به روش کلونجر انجام شد. فعالیت آنزیم های آلفا آمیلاز و آلفا گلوکوزیداز در حضور اسانس روغنی هر یک از گیاهان اندازه گیری شد. بررسی پارامتر های بیوشیمیایی بر روی این دو آنزیم نشان داد که بهینه فعالیت آنزیم آلفا آمیلاز استخراج شده در pH های 4 تا 5 و آلفا گلوکوزیداز در pH 2 می باشد. در بررسی پایداری این دو آنزیم، فعالیت آنها در بازه دمایی 4 تا 35 درجه سانتی گراد اندازه گیری شد. پایداری آلفا آمیلاز و آلفا گلوکوزیداز به ترتیب در pH های 4 تا 5 و 2 تا 4 بود. همچنین دمای بهینه برای آلفا آمیلاز و آلفا گلوکوزیداز در دمای 40 درجه سانتی گراد مشخص گردید. بررسی فعالیت آلفاآمیلاز در محلول یون های فلزی نشان داد که باافزایش غلظت یون های CaCl2، KCl و MgCl2 فعالیت روند افزایشی دارد در حالی که این افزایش غلظت در FeCl2 باعث کاهش فعالیت و برای یون NaCl بر فعالیت آنزیم بی تاثیر بود. در تمامی محلولهای MgCl2 و CaCl2 و FeCl2 و KCl و NaCl با افزایش غلظت، افزایش فعالیت آلفاگلوکوزیداز اندازه گیری شد. میزان پروتئین موجود در عصاره آنزیمی استخراج شده 2/0 میلی گرم در میلی لیتر به دست آمد. همچنین مقادیر Km و Vmax برای آلفا آمیلاز به ترتیب 13/0 میلی گرم در میلی لیتر و 062/0 میلی گرم در میلی لیتر بر دقیقه و برای آلفا گلوک