محمد جواد چایچی

علت اصلی بسیاری از بیماریهای مختلف معده عفونت هلیکوباکترپیلوری است. یکی از مشخصههای هلیکوباکترپیلوری تولید اورهآز است که سرعت هیدرولیز اوره را به دیاکسیدکربن و آمونیاک 17 برابر سریعتر 19 کاتالیز میکند. آنزیم اورهآزبا تولید آمونیاک عالوه برآسیب عملکردی ومورفولوژیکی اپیتلیوم معده با تشکیل ابر محافظتی آمونیوم اطراف هلیکو باکتر پیلوری زمینه رشد و تولید مثل این باکتری درمحیط اسیدی معده را فراهم میکند و مهار اورهآز یک راه موثر در درمان عفونت هلیکوباکترپیلوریاست. برایمطالعات مهاریازنظربیوشیمیایی در بین آنزیمهای گیاهان، اورهآز باقال به طور گسترده استفاده میشود. اورهآز باقال یک متالو آنزیم حاوی دو یون نیکل در جایگاه فعال خود میباشد. فالونوئیدها اثر مهاری مهمی بر فعالیت اورهآز نشان دادهاند. فالون آپیژنین (Trihydroxyflavone-7,5',4 (از گروه O-گلیکوزیدی از فالونوییدهای موثر در بسیاری از مواد غذایی میباشد. هدف انجام پژوهش حاضر، بررسی پیوند آپیژنین به آنزیم اورهآز باقال و مطالعه اثر مهاری آن با استفاده از طیف- سنجی مرئی- فرابنفش، طیفسنجی فلورسانس، طیفسنجیCD و داکینگ ملکولی است. اثر آپیزنین بر سینتیک آنزیم اورهآز، در بافر تریس با pH برابر 8/6 و دمای اتاق بررسی شد، نتایج حاصل نشاندهندهی کاهش فعالیت 1-min.mM کاتالیتیکی اورهآز در حضور آپیژنین است. Km و Vmax آنزیم به ترتیب mM 69/9 و 66/0 به دست آمد و در حضور آپیژنین Km افزایش یافته و Vmax تقریبا ثابت مانده که نشان دهنده مهار رقابتی آپیژنین بر فعالیت 1-M آنزیم اورهآز میباشد. مقدار Ki برای آپیژنین برابر µ 105/49 به دست آمد. طیف نشر فلورسانس در غلظت- های مختلف آپیژنین و محدوده طول موجهای 337-647 نانومتر بررسی شد. با افزایش غلظت آپیژنین در محلول، 17 16 Ls 1-1mol -نشر ذاتی اورهآز کاهش یافته و آپیژنین باعث خاموشی از نوع استاتیکی با ثابت اشترن-ولمر(Kq( 1-M × 756/6 شده است. ثابت اتصال برای این برهمکنش 33/88 محاسبه شد و تقریبا به هر ملکول اورهآز یک مولکول آپیژنین متصل شدهاست. برای مطالعه اثرات متقابل آپیژنین بر ساختار ثانویه اورهآز، CD-UV ناحیه دور در محدوده 147 تا 667 نانومتر گرفته شد. نتایج بدست آمده تفاوت چندانی بین پروتئین و کمپلکس نشان نداد و ساختار ثانویه منظم و رندوم کویل پروتئین پس از اتصال آپیژنین به ترتیب کمتر از دو درصد و کمتر از یک