باقر سیدعلیپور

اگزوزوم ها وزیکول هایی (30-100nm) هستند که درارتباطات بین سلولی نقش داشته و تأثیر مهمی در فرایندهای بیولوژیکی و پاتولوژیکی دارند. این تحقیق به بررسی ترشح اگزووزم ها در فیبروبلاست های پوست انسان در آزمایشگاه پرداخته است. مایع رویی فیبروبلاست های جوان(پاساژ3 )و پیر(پاساژ 12) کشت یافته در محیط DMEM حاوی 10%FBS و یا فاقد سرم گاوی جمع آوری گردید. پس از تایید با میکروسکوپ الکترونی روبشی، میزان اگزوزوم به روش فلوسایتومتری با استفاده از بید های مغناطیسی پوشیده از آنتی بادی اختصاصی (anti CD81 )اندازه گیری شد و با SDS-PAGE نیز پروفایل پروتئینی بررسی گردید. نتایج مطالعه با میکروسکوپ الکترونی وجود اگزوزوم به قطر33-93nm)) درمایع رویی کشت فیبروبلاست ها را نشان داد. میانگین فراوانی اگزوزوم درمایع رویی فیبروبلاست های پیرکه به مدت 16 و 72 ساعت در شرایط فقر سرم کشت یافته اند نسبت به گروه کنترل کاهش معنی داری را نشان داد(P<0.05). در حضور سرم تغییر معنی داری در فراوانی اگزوزوم بین فیبروبلاست های جوان و پیر وجود ندارد. در گروه فیبروبلاست های جوان تفاوت معناداری بین سلول های کشت یافته در شرایط فقرسرم با گروه کنترل در هیچ یک از نمونه ها که به مدت 16,48,72ساعت کشت در محیط فاقد سرم را تجربه کردند وجود نداشت. نتایج داده ها بر اساس غلظت اگزوزوم (AU/mL) و میانگین شدت فلورسنت (MFI) در شرایط فوق نیز همخوانی با یافته های بالا دارد. همچنین بررسی الگوی الکتروفورزی نشان دادکه اگزوزوم های فوق دارای پروتئین با وزن مولکولی 14-116kDa می باشند . تفاوت قابل توجهی در الگوی پروتئینی استخراج شده از اگزوزوم های جدا شده از فیبروبلاست های پیر با فیبروبلاست های جوان مشاهده نشد. همچنین تراکم باندهای پروتئینی در اگزوزوم های جدا شده از فیبروبلاست های پیر و جوان کشت یافته در شرایط فقر سرم به صورت قابل توجهی کمتر از گروه کنترل می باشد. به استثنا یک مورد که تفاوتی مشاهده نشد. در فیبروبلاست های پیر چه از نظر تعداد اگزوزوم و چه از نظر الگوی پروتئینی آن تغییر چشمگیری پیدا نمی کند اما درشرایط فقر سرم این تفاوت معنادار خواهد بود. همچنین تحت شرایط فقر سرم تعدا اگزوزوم گرچه به طور کلی کاهش می یابد اما این تغییر معنی دار نیست. در حالی که تراکم باندهای پروتئینی کاهش قابل ملاحظه ای را نشان می دهد. فیبروبلاست ها حتی تحت استرس نا