1403/01/10
مریم مهاجرانی

مریم مهاجرانی

مرتبه علمی: دانشیار
ارکید:
تحصیلات: دکترای تخصصی
اسکاپوس:
دانشکده: دانشکده علوم پایه
نشانی:
تلفن: 01135302455

مشخصات پژوهش

عنوان
مطالعه سینتیکی و ساختاری آنزیم اورهآز در حضور سینامالدهید و ائوژنول
نوع پژوهش
پایان نامه
کلیدواژه‌ها
اوره آز، سینامالدهید، اوژنول، سنجش آنزیمی، طیف سنجی فلورسانس، داکینگ مولکولی
سال 1397
پژوهشگران بشری محمدی احمدوندی(دانشجو)، ملیحه سادات عطری(استاد راهنما)، مریم مهاجرانی(استاد مشاور)

چکیده

آنزیم اوره آز (EC 3.5.1.5 ) یک متالوآنزیم و دارای اتمهای نیکل در جایگاه فعال خود است و واکنش هیدرولیز اوره به آمونیاک و دیاکسیدکربن را کاتالیز میکند. این آنزیم در بسیاری از موجودات از جمله گیاهان، قارچها، باکتریها و بسیاری از میکروارگانیسمها یافت میشود. باکتریهای تولیدکننده اوره آز بر روی سلامت انسان و محیط زیست اثرات منفی دارند. هلیکوباکترپیلوری یک باکتری بیماریزا و مسئول ایجاد عفونت و زخم معده است و با خنثی کردن اسید معده به وسیله آمونیاک حاصل از هیدرولیز اوره، در محیط اسیدی زنده میماند. درمان عفونت باکتری معمولا به وسیله آنتی- بیوتیکها حاصل میشود. با این وجود به دلیل مقاومت رو به افزایش باکتریها نسبت به آنتیبیوتیک، درمانهای جایگزین و استفاده از ترکیبات طبیعی بسیار مورد توجه قرار گرفته است. یک هدف برای از بین بردن باکتری، میتواند مهار کردن آنزیمهای آن باشد. سینامالدهید و ائوژنول به ترتیب دو ترکیب اصلی موجود در اسانس دارچین و میخک هستند که خاصیت آنتی باکتریال و آنتی اکسیدانی آنها از قبل ثابت شده است. در این پژوهش تاثیر سینامالدهید و ائوژنول بر فعالیت آنزیم اوره آز مطالعه گردید. با استفاده از روش طیفسنجی مرئی-فرابنفش و رسم نمودار لاینویور-برک Km و Vmax اوره آز به ترتیب برابر با mM 3/08 و mM. min1- 8/95 به دست آمد. در آزمایشهای بعدی فعالیت آنزیم در حضور سینامالدهید و ائوژنول به صورت جداگانه مطالعه شد. نتایج سنجش آنزیمی به وسیله طیفسنجی فرابنفش-مرئی نشان داد که سینامالدهید با افزایش مقدار Km و ثابت ماندن Vmax دارای اثر مهار رقابتی بر فعالیت آنزیم اوره آز است. مقدار Ki برای سینامالدهید 31 / 9 میکرومولار به دست آمد. از سوی دیگر مطالعات نشان داد که ائوژنول دارای اثر مهار مختلط بر فعالیت آنزیم اوره آز است و در حضور ائوژنول Km افزایش و Vmax کاهش پیدا کرد. مقدار Ki برای ائوژنول 935 میکرومولار به دست آمد. برهمکنش بین سینامالدهید و ائوژنول با آنزیم اوره آز به وسیله طیفسنجی فلورسانس ذاتی مطالعه گردید. در این مطالعه طیف نشری ذاتی اوره آز در حضور غلظتهای مختلف سینامالدهید و ائوژنول به صورت جداگانه در محدوده طولموجهای 290 تا 500 نانومتر مطالعه شد. سینامالدهید و ائوژنول هر دو باعث خاموشی نشر فلورسانس ذاتی آنزیم اوره آز میشوند. با استفاده از نمودار اشترن-ولمر ثابت اتصال برای برهمکن