باقر سیدعلیپور

سوپر اکسید دیسموتاز 1انسانی ( )hSOD1یک آنزیم آنتی اکسیدانی است که رادیکال سوپر اکسید را به هیدروژن پراکسید و اکسیژن تبدیل می کند. بیش از 100جهش در این آنزیم یافت شده است که باعث بیماری اسکلروز جانبی آمیوتروفیک ( )ALSمی شوند. هدف از این پژوهش بررسی تاثیر جهش L106Vواقع در لوپ Ⅵسوپر اکسید دیسموتاز بر ساختار و فعالیت آن می باشد. از ژن سوپر اکسید دیسموتاز موجود در پلاسمید -pET (+) 28aبه عنوان الگو برای جهش زایی هدف دار با روش Quick-change PCRاستفاده شد. پس از تایید جهش ، پلاسمید حاوی جهش به باکتری بیانی E.coliسویه ی ) BL21(DE3انتقال داده شد . برای بیان پروتئین از القا کننده های IPTGو لاکتوز استفاده شد . خالص سازی پروتئین به روش کروماتوگرافی تمایلی نیکل_سفارز انجام شد و برای تعیین خلوص پروتئین از ژل SDS_PAGEاستفاده شد. تعیین فعالیت ویژه آنزیم جهش یافته و وحشی با استفاده از سوبسترای پیروگالول در طول موج 420نانومتر با روش اسپکتروفتومتری انجام شد. مطالعات ساختاری با کمک تکنیکهای فلورسانس ذاتی وفلورسانس خارجی با نشانگر ANSانجام شد. نتایج حاصل از این مطالعه نشان می دهد که فعالیت ویژه آنزیم وحشی و جهش یافته L106Vبه ترتیب 7031/25 U/mgو 7238/65 /mgاست. مطالعات ساختاری با فلور سانس ذاتی نشان داد که شدت نشر فلور سانس ذاتی جهش یافته L106Vبه طور جزئی کمتر از حالت وحشی است. افزایش شدت نشر فلورسانس خارجی در جهش یافته ی L106V نسبت به حالت وحشی بیانگر دسترسی بیشتر پاکت های سطحی هیدروفوب به ANSمی باشد. بنابراین جهش L106Vدر ژن سوپراکسید دیسموتاز به عنوان عامل ژنتیکی مرتبط به شکل ارثی اسکلروز جانبی آمیوتروفیک می باشد