مجتبی محسنی

سوپراکسید دیسموتاز انسانی یک آنزیم همودیمر است که هر زیر واحد آن دارای یک بشکه ی بتا می باشد که از 8 رشته ی بتا تشکیل شده است.که با هفت لوپ به همدیگر متصل شده است. هر زیر واحد دارای یک یون مس با نقش کاتالتیک و یک یون روی با نقش ساختاری می باشد. سوپراکسید دیسموتاز یک نوع آنزیم آنتی اکسیدان است که آنیون سوپر اکسید تولید شده را تخریب می کند. در این تحقیق پلاسمید pET28a حاوی ژن کد کننده سوپر اکسید دیسموتاز انسانی و E.coli سویه DH5α مورد استفاده قرار گرفت. سپس محصول تکثیر با استفاده از کیت شرکت فرمنتاز خالص شد و با افزودن DpnI و تیمار به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد هضم آنزیمی پلاسمید الگو و انتقال پلاسمید به سلول E. coli سویه DH5α با استفاده از روش شیمیایی انجام شد. جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری ها روی محیط حاوی آنتی بیوتیک مناسب (کانامایسین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید صورت گرفت. پس از حصول اطمینان از کیفیت استخراج پلاسمید از طریق بررسی برروی ژل آگارز 1%، نمونه ها جهت تعیین ترادف به شرکت تکاپو زیست ارسال شد ردیف نوکلئوتیدی و پروتئینی نمونه های وحشی تایید شد. مطالعات ما با استفاده از نرم افزار yasara و سایت expasy نشان داد تغییر در لوپ 4 با بیماری اسکلروز جانبی آمیوتروفیک در ارتباط است